Лабораторная диагностика риккетсиозов сельскохозяйственных животных

 

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь

Витебская государственная академия ветеринарной медицины

Кафедра микробиологии и вирусологии

Курсовая работа на тему:

Лабораторная диагностика риккетсиозов сельскохозяйственных животных

Витебск - 2011

Общая характеристика патогенных риккетсий

Риккетсиозы - группа заболеваний многих видов животных и человека, вызываемые внутриклеточными паразитами (риккетсиями), которые передаются в основном трансмиссивно и проявляются у животных лихорадками, пневмониями, ринитами, абортами и послеродовыми эндометритами, а также поражением лимфатической системы и форменных элементов крови.

Риккетсии названы в честь американского микробиолога Говарда Тейлора Риккетса, открывшего в 1909 году возбудителя одного из риккетсиозов - пятнистую лихорадку Скалистых гор и погибшего при его исследовании (1910).

Риккетсии довольно многочисленная группа, представленная патогенными и непатогенными видами. Патогенных видов значительно меньше. В природе риккетсии обитают преимущественно в организме насекомых (вшей, блох, клещей), а также грызунов, диких и сельскохозяйственных животных.

Таксономия

В настоящее время риккетсии классифицируются, согласно Определителя бактерий Берджи (1984; 1994) следующим образом:

Царство Procariotae

Отдел Gracilicutes

Секция 9. Rickettsii et Chlamydii. Риккетсии и хламидии.

Порядок I. Rickettsiales.

Порядок Rickettsiales

Сем. Rickettsiaceae Сем. Bartonellaceae Сем. Anaplasmataceae

Род 1 Rickettsia Род 1 Bartonella Род 1 Anaplasma

Род 2 Rochalimaea Род 2 Grahamella Род 2 Aegyptianella

Род 3 Coxiella Род 3 Haemobartonella

Род 4 Ehrlichia Род 4 Eperhytrozoon

Род 5 Cowdria

Род 6 Neoriсkettsia

Род 7 Wolbachia

Род 8 Rickettsiella

Ниже приведены основные патогенные роды и виды риккетсий:

Род 1 Rickettsia

Вид R.conjunctivae - возбудитель риккетсиозного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота

Вид R. prowacheki - возбудитель эпидемического сыпного тифа

Всего шестнадцать видов

Род 3 Coxiella

Вид C. burnetii - возбудитель Ку-лихорадки (Ку-риккетсиоза)

Род 4 Ehrlichia

Вид E. canis - возбудитель эрлихиоза собак (эрлихиозного (Rickettsia canis) моноцитоза)

Вид E. phagocytophila - возбудитель эрлихиоза жвачных и всеядных (E. bovis, E. ovis) (эрлихиозного моноцитоза, риккетсиозного моноцитоза)

Вид E. egui - возбудитель эрлихиоза лошадей

Вид E. senetsee - возбудитель лихорадки долины реки Пото- (E. risticii) мак (эрлихиозного колита, моноцитарного эрлихиоза, синдрома диареи лошадей)

Род 5 Cowdria

Вид C. ruminantium - возбудитель риккетсиозного гидроперикардита (коудриоза, инфекционного гидроперикардита, сердечной водянки крупного и мелкого рогатого скота)

Род 6 Neorikettsia

Вид N. helminthoeca - возбудитель неориккетсиоза (эрлихиоза) собак

Род 7 Wolbachia

Вид W. melophagi

Вид W. persise - возбудители болезней насекомых

Вид W. pipientis

Род 2 Grachamella

Вид G. peromysci - возбудитель болезни грызунов

Вид G. talpae - возбудитель болезни кроликов

Род 1 Anaplasma

Вид A. centrale - возбудитель анаплазмоза крупного рогатого скота

Вид A. marginale

Вид A. ovis - возбудитель анаплазмоза овец и коз

Роз 3 Haemobartonella

Вид H. canis

Вид H. felis - возбудители заболеваний собак, кошек,

Вид H. muris диких грызунов

Род 4 Eperythrozoon

Вид E. ovis - возбудитель эперитрозооноза овец

Вид E. suis - возбудитель эперитрозооноза свиней

Вид E. wenyonii - возбудитель эперитрозооноза крупного рогатого скота

Согласно 9-го издания (1994) Определителя бактерий Берджи в 2-х томах риккетсии также оставлены в группе (секции) 9 Риккетсии и хламидии, в которой упразднена таксономическая категория триба, остальные таксономические категории - семейства, роды и виды - остались без изменений.

В соответствии с родовой, видовой принадлежностью большую часть патогенных риккетсий подразделяют на группы заболеваний: заболевания вызываемые эрлихиями - эрлихиозы, коудриями - коудриозы, неориккетсиями - неориккетсиозы, анаплазмами - анаплазмозы, бартонеллами - бартонеллезы и т.д.

В настоящее время наибольшую актуальность имеют возбудители: Ку-лихорадки - C. burnetti, риккетсиозного кератоконъюнктивита - R. сonjunctivae, анаплазмоза крупного рогатого скота - A. centrale, A. marginalae и анаплазмоза овец и коз A. ovis.

Морфологические свойства

Строение риккетсий аналогично строению прочих бактерий. У риккетсий выделяют оболочку, цитоплазму и зернистые включения. Ядерная структура представлена зернышками (от 1-2 до 4). В клетках выявляют ДНК и РНК.

Риккетсии полиморфны. Все многообразие их форм может быть сведено к четырем основным морфологическим типам (по П.Ф. Здродовскому, 1972), (рис. 1, приложение 1):

Тип а. Кокковидные, монозернистые риккетсии, размер 0,3-1 мкм (чаще 0,5 мкм) в диаметре, это наиболее патогенный тип, типичны для интенсивного размножения возбудителя в клетках (рис 1 а);

Тип в. Палочковидные, биполярные (гантелевидные), размер: ширина 0,3 мкм, длина 1-1,5 мкм (также выделяются при активном развитии риккетсиоза) (рис. 1 в).

Тип с. Бациллярные, удлиненные, обычно изогнутой формы, размер: в ширину 0,3-1 мкм, в длину 3-4 мкм (выделяются в начальном периоде болезни, слабовирулентные, часто бизернистые палочки, иногда могут включать по 4 зернышка парно расположенных на полюсах) (рис. 1 с).

Тип d. Нитевидные, полизернистые риккетсии имеют вид длинных причудливо прогнутых нитей, размер: ширина 0,3-1 мкм, длина 10-40 мкм и более; (их выделение также характерно для начальных стадий инфекции - показатель раннего умеренного риккетсиоза) (рис. 1,d).

Встречаются также очень мелкие до 0,2 мкм, проходящие через бактериальные фильтры и невидимые в обычном световом микроскопе формы, которые являются ранней стадией внутриклеточной репродукции возбудителя болезни.

Риккетсии неподвижны, спор и капсул не образуют.

Риккетсии размножаются как и бактерии простым поперечным делением. Выделяют 2 типа деления:

обычное деление кокковидных а - и в - форм с образованием гомогенных популяций;

размножение дроблением нитевидных d - форм с последующим образованием популяций, состоящих из клеток а - и в - типов.

Тинкториальные свойства

Риккетсии окрашиваются грамотрицательно.

Кокковидные формы риккетсий окрашиваются по Романовскому-Гимзе и Цилю-Нильсону в красный цвет, палочковидные и нитевидные в красно-голубой (зерна-гранулы красные, цитоплазма между ними голубая), по Здродовскому - в красный цвет (рис. 2, приложение 2).

Окраска по методу Романовского-Гимзе является классической для выявления риккетсий внутри и вне клеток.

Техника окраски по методу Романовского-Гимзе: препараты-мазки, приготовленные из микробной культуры, высушивают на воздухе 24 часа, фиксируют химическим способом и укладывают в чашки Петри на стеклянные палочки мазком вниз. Краску разводят из расчета одна капля на 1 мл дистиллированной воды (рН 6,8-7,0). Препараты окрашивают холодным (в течение 4-24 часов) или горячим способми (под препараты мазки наливают раствор краски подогретой до 90 0С, красят 20 минут. После окрашивания препараты промывают водой, высушивают и микроскопируют.

В случае необходимости окрашенные препараты можно дополнительно дифференцировать слабым раствором 0,5 % лимонной кислоты в результате чего улучшается контрастность окраски риккетсий в отношении общего фона.

Чаще используют холодный метод. При этом цитоплазма риккетсий окрашивается в фиолетовый или голубой цвет, а ядерные гранулы в красный.

Окраска риккетсий по Романовскому-Гимзе даёт хорошие результаты лишь при соблюдении определенных требований (надежная фиксация препарата, хорошее качество краски, требуемая рН воды, достаточно длительная окраска).

Для текущей работы метод мало пригоден, так как требует длительного времени.

Чаще в практике используют методы дифференциальной окраски фуксином и метиленовым синим, это методы окраски по Здродовскому и Маккиавелло. Суть окраски этими методами заключается в том, что риккетсии имеют известную кислотоустойчивость. После окраски препаратов фуксином, их дифференцируют кислотой и докрашивают метиленовым синим. В итоге риккетсии сохраняют окраску фуксина, а тканевые элементы, окрашиваются в контрастный синий или голубой цвет.

Техника окраски по методу П.Ф. Здродовского: данный метод является облегченной модификацией способа Циля-Нильсена (обычный карболовый фуксин Циля - основной фуксин 1 г, фенол 5 г, спирт 10 мл, дистиллированная вода 100 мл) разводят в соотношении 10-15 капель на 10 мл дважды дистиллированной воды или фосфатного буфера при рН 7,4. Препарат, сделанный тонким слоем, высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем, окрашивают разведенным фуксином 5 минут. Затем промывают водой, быстро (2-3 сек) дифференцируют погружением в ванночку с кислотой (0,5 % лимонной или 0,15 % уксусной, либо 0,01% соляной и др.), промывают водой и докрашивают 10 секунд 0,5 % водным раствором метиленовой сини, промывают, подсушивают фильтровальной бумагой. Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет, клеточные элементы - в голубой (протоплазмы) или синий (ядро) цвет.

Техника окраски по методу Маккиавелло: подсушенный препарат фиксируют пламенем спиртовки, окрашивают через фильтровальную бумагу фуксином (0,25 % щелочной раствор основного фуксина, рН 7,2-7,4) 4 минуты, промывают водой, погружают в 0,25 % раствор лимонной кислоты по 1-3 секунды, окрашивают 0,5 % водным раствором метиленовой сини, промывают, подсушивают фильтровальной бумагой. Риккетсии окрашиваются в красный цвет на синем фоне (рис. 3).

Культуральные и биохимические свойства

Патогенным риккетсиям свойственнен внутриклеточный паразитизм. Риккетсии не культивируются на обычных питательных средах. Их репродуцируют на развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ), в культуре клеток или в организме лабораторных животных.

Риккетсии - аэробы, поглощают О2 и выделяют СО2, образуют гемолизины, активно окисляют глутаминовую кислоту, выделяя углекислый газ, но индифферентны к глюкозе, образуют эндотоксины, сходные в иммунологических реакциях с бактериальными токсинами, но будучи связанными с риккетсиями в окружающую среду не выделяются.

Токсинообразование

Патогенные риккетсии образуют токсические вещества, играющие важную роль в патогенезе риккетсиозов. От бактериальных токсинов их отличает неотделимость от микробных клеток и их чрезвычайная неустойчивость. Эндотоксины сходны в иммунологических реакциях с бактериальными токсинами, но будучи связаны с риккетсиями, в окружающую среду не выделяются. В то же время они не тождественны эндотоксинам, так как термолабильны (белки) и неустойчивы к действию формалина (при иннактивации сохраняют свои иммуногенные свойства). Всем патогенным видам присущи гемолитические свойства.

Устойчивость

Выживаемость в жидких средах зависит от их свойства, рН и ТоС, лучше сохраняются в белковых средах с нейтральной или слабощелочной рН. Так, Coxiella burnetii сохраняется в молоке при 4оС до 2-х месяцев. В высушеном состоянии сохраняются дольше на различных субсиратах (фекалии вшей) до 1 - 3 лет.

Во внешней среде устойчивость риккетсий (кроме C. burnetii) невысокая. Нагревание во влажной среде до 50-60 0С обеспечивает гибель риккетсий через 5-30 мин, при 70 0С - через 1-3 мин. Риккетсии Бернета (возбудитель Ку-лихорадки) выдерживают длительное (30-90 мин) нагревание при 60-63 0С и полностью погибают только при кипячении. Низкие температуры не убивают, а консервируют риккетсий. Консервируются при минус 20-70 0С, в замороженном состоянии длительное время сохраняют жизнеспособность и вирулентные свойства.

При воздействии на риккетсий различных дезосредств в обычных концентрациях (3-5 % фенол, 2 % хлорамин, 2 % формальдегид, 10 % перекись водорода, 10 % гидроокись натрия), их гибель наступает через 5 мин, а 1 % раствор хлорной извести убивает риккетсий через 1 минуту.

Риккетсии чувствительны к тетрациклину, дибиомицину, синтомицину, левомицетину и сульфаниламидам.

Лиофилизация обеспечивает длительное сохранение (годами).

Патогенность

Патогенность риккетсий определяется их способностью проникать в чувствительные к ним клетки, где происходит их размножение, синтезировать токсин, действие которого проявляется лишь при жизни микроорганизмов. Токсин не секретируется как истинные экзотоксины и не вызывает интоксикацию организма после гибели возбудителя, как эндотоксины. Он термолабилен, разрушается при нагревании микробной суспензии до 600С. внутривенное введение взвеси живых риккетсий белым мышам, вызывает острую интоксикацию и смерть животных через 2-24 часа.

Риккетсиям свойственна изменчивость проявляющаяся снижением и утратой вирулентности с сохранением иммуногенных свойств, что используют при изготовлении живых авирулентных вакцин.

Дифференциация риккетсий от вирусов и прокариотных микроорганизмов

Риккетсии схожи как с вирусами, так и с бактериями, но существует ряд отличительных особенностей.

Сходство с прокариотными микроорганизмами:

риккетсии имеют трехслойную клеточную стенку;

содержат два типа нуклеиновых кислот, рибосомы и систему дыхания сходную с прокариотами;

окрашиваются анилиновыми красителями;

чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, сульфаниламидам, а некоторые виды (N. hilminthoeca) к широкому спектру антибиотиков.

Сходство с вирусами:

риккетсии облигатные внутриклеточные паразиты;

самые мелкие формы риккетсий обладают фильтруемостью через бактериальные фильтры;

риккетсии способны культивироваться только в живой клетке (РКЭ, КК, организме лабораторных животных);

риккетсии обладают тканевым тропизмом;

для риккетсий характерно отсутствие строгой хозяиноспецифичности.

рикетсии стимулируют выработку интерферона.

Сравнительная характеристика прокариотных микроорганизмов и вирусов

№Дифференцирующие признаки БактерииМикоплазмы Риккетсии Хламидии Вирусы 1.Размер до 0,5 мкм-+±±++2.Клеточная оболочка+-++-3.Два типа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК)++++-4.Ядро без ограничивающей мембраны++++-5.Бинарное деление++++-6.Рибосомы прокариотного типа++++-7.Окраска анилиновыми красителями++++-8.Рост на искусственных питательных средах++---9.Рост в живой клетке (РКЭ, КК, организме лабораторных животных)-++++10.Ингибирование антибиотиками и сульфаниламидами++++±±11.Образование внутриклеточных включений в пораженной клетке---++12.Наличие в биологическом цикле членистоногих--+-±±

Таким образом для микроорганизмов порядка Rickettsiales свойственны:

плеоморфизм;

неподвижность;

грамотрицательное окрашивание;

патогенность для многих видов сельскохозяйственных животных, человека и членистоногих;

невысокая устойчивость во внешней среде (кроме C. burnetii);

особая чувствительность к антибиотикам тетрациклинового ряда.

Основной отличительной особенностью от прокариотных микроорганизмов и вирусов является наличие в цикле развития риккетсий членистоногих (вшей, клещей, блох).

Возбудитель Ку-риккетсиоза (Ку-лихорадка)

Возбудитель - Coxiella burnetii.

Ку-лихорадка (от анг. guery - неясный, неопределённый, сомнительный) - природно-очаговая зооантропонозная болезнь домашних, промысловых и диких млекопитающих и птиц, чаще протекающая бессимптомно, характеризуется развитием ринита, бронхита, пневмонии, конъюнктивита, плеврита, мастита (у самцов орхита), а также абортами.

Название болезни произошло от первой буквы английского слова Guery fever буквально: «вопросительная лихорадка», так как в начале причина была не ясна, то есть «лихорадка не выясненного происхождения».

Как отдельные заболевание впервые Ку-лихорадка была выявлена в 1935 году Дёрриком в Южном Куинсленде (Австралия), возбудитель был идентифицирован в 1937 году и по предложению Дёррика назван Coxiella burnetii. Независимо от австралийских исследоварелей в США Кокс выделил фильтрующийся агент клещей переносчиков, доказав его риккетсиозную природу (1938).

Краткие эпизоотологические данные

Ку-риккетсиоз имеет повсеместное распространение, но чаще встречается в Австралии.

Экономический ущерб, причиняемый Ку-риккетсиозом значительный. Он складывается: из недополучения приплода животных (аборты, рождение нежизнеспособного молодняка, бесплодие); снижением удоя у коров и яйценоскости у домашних птиц и истощения.

К риккетсиям Бернета наиболее восприимчивы крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, лошади, верблюды, буйволы, собаки, куры, гуси и голуби. C. burnetii способны спонтанно инфицировать 70 видов млекопитающих, 50 видов птиц и более 50 видов различных клещей из родов Dermacentor, Ambliomma, Yxodes, Rhipiceрhalus, Hyalomma, Haemaphisalis, а также десяти видов вшей и блох.

Источником возбудителя инфекции могут служить восприимчивые животные, а также в природных очагах клещи и грызуны, которые являются резервуаром возбудителя.

В естественных условиях животные и человек заражаются трансмиссивно через укусы клешей, аэрогенно, алиментарно с кормом и водой, через загрязненные экскретами больных животных корма, животное сырье (кожа, шерсть, мясо, молоко и др.).

Инфицированные животные выделяют возбудителя с кровью, слюной, мочой, калом и молоком. Особенно инфицированы плодные оболочки и воды, поэтому человек чаще заражается при родовспоможении.

При совместном содержании больных и здоровых животных возбудитель может передаваться и прямым путем. Особую опасность представляют в стадах животных инфицированные сторожевые собаки, выделяющие возбудителя с мочой и калом. Они чаще заражаются при поедании плацент, через укусы клещей.

Эпидемические вспышки Ку-лихорадки в сельских местностях чаще совпадают с сезонами отела и окота.

В местности с теплым климатом Ку-риккетсиоз встречается чаще и протекает тяжелее.

В.Я. Никитин и Л.Д. Тимченко (1994), проводя исследования в трех хозяйствах. Ставропольского края и Белгородской области установили диагноз на Ку-лихорадку, которая проявлялась кератоконъюнктивитом. У 36 % коров с поражением глаз регистрировали задержание последа, некротические изменения в околоплодных оболочках и эндометриты (98-100 %).

У больных животных в маточных выделениях были обнаружены в 78 % случаев риккетсии Бернета.

Благодаря бессимптомному хроническому течению летальность при Ку-риккетсиозе минимальна.

Патогенез

При Ку-лихорадке патогенез наиболее полно изучен на экспериментальных животных. Установлено, что возбудитель, попав в организм хозяина аэрогенным, алиментарным, контактным или трансмиссивным путем, вызывает состояние риккетсиемии и затем размножается в тканях и клетках СМФ - гистиоцитах и макрофагах, после разрушения которых отмечается генерализация процесса и токсинемия. После стадии генерализации, вследствие выраженной избирательной способности возбудителя к тканям, процесс локализуется и C. burnetii начинают обильно размножаться в легких, лимфоузлах, вымени, семенниках и особенно часто в беременной матке. В результате образуются микронекротические фокусы, заменяющие в последующем соединительной тканью. Из локальных фокусов возбудитель вновь может проникать в кровяное русло.

Такая органотропность приводит к абортам, конъюнктивитам, бронхопневмониям, маститам и выделению риккетсий с околоплодной жидкостью, плацентой, истечениями из глаз, носа и молоком.

В процессе инфекции развивается реакция гиперчувствительности замедленного типа и обнаруживаются комплементсвязывающие антитела.

Основные симптомы и патологоанатомические изменения

Инкубационный период при Ку-лихорадке продолжается от 3 до 30 дней. Болезнь развивается медленно, часто латентно с накоплением специфических антител в сыворотке крови.

На третий день инкубационного периода (после экспериментального заражения) у крупного рогатого скота повышается температура тела до 41-41,8 0С и удерживается 3-5 дней. Отмечают угнетение, отказ от корма, серозный ринит и конъюнктивит, значительное и длительное (до нескольких месяцев) снижение удоя молока, у стельных коров аборты, плацентиты. В течение 3-8 месяцев регистрируют повторные нерегулярные подъемы температуры тела.

В естественных условиях заражения болезнь у коров протекает чаще бессимптомно и выявляют ее лишь серологическими исследованиями и заражением лабораторных животных. Однако иногда отмечают приступы острого лихорадочного состояния, аборты во втором периоде стельности, длительное выделение риккетсий с молоком, мочой, испражнениями. Кроме того, отмечают бронхопневмонию, поражение половых органов, маститы (у быков орхиты), конъюнктивиты.

Тяжело протекает у животных экспериментальная инфекция: с поражением селезенки и других внутренних органов, абортами.

Патологоанатомические изменения не специфичны, у стельных коров поражаются легкие, плодные оболочки и матка, наблюдают очаги фибринозного мастита, увеличение и гиперемию надвымянных лимфоузлов, увеличение селезенки с полосчатыми и точечными кровоизлияниями, отек междольчатой соединительной ткани легких и дистрофические изменения в печени и почках.

Характеристика возбудителя

Морфологические и тинкториальные свойства.

Риккетсии Бернета (Coxiella burnetii) - плеоморфные микроорганизмы, преобладают кокковидные и палочковидные формы шириной 0,2-0,4 мкм и длиной 0,4-1 мкм, реже нитевидной формы до 10-12 мкм, располагаются одиночно, попарно, иногда короткими цепочками. Образуют фильтрующиеся формы, способны к фазовой изменчивости. Встречаются в природе в I фазе, а после длительных пассажей превращаются во II фазу. Риккетсии II фазы склонны к спонтанной агглютинации и агглютинации в нормальной сыворотке крови, фагоцитируются при отсутствии антител (см. п. 2.4.3.). Иногда образуют спорообразные формы, обеспечивающие устойчивость к высоким температурам и высушиванию.

Культуральные свойства.. burnetii - аэробы, культивируюся при 37 0С будучи облигатными внутриклеточными паразитами коксиеллы не растут на обычных питательных средах.

В условиях лаборатории коксиелл культивируют в РКЭ, организме лабораторных животных (белые мыши, морские свинки, хомячки, кролики), реже - в иксодовых клещей, а также в культурах клеток (фибробласты, клетки L и другие).

Антигенная структура.

Антигенная структура риккетсий Бернета отличается от микроорганизмов семейства Rickettsiaceae, серологических перекрестов с другими риккетсиями не установлено. Они имеют два антигена: поверхностный (растворимый) полисахаридный, присутствует у риккетсий фазы 1 и соматический (корпускулярный) - у фазы 2. Оба антигена иммунологически активны и вызывают образование антител у экспериментально и естественно зараженных животных. Диагностический титр антител к антигенам фазы 1 появляется на 40-60 день, а к антигенам из фазы 2 на 7-10 день.

У людей антигены второй фазы используют для иммунизации и в качестве аллергена для постановки внутрикожных проб.

Устойчивость

Риккетсии Бернета более устойчивы к факторам внешней среды по сравнения с другими риккетсиями, как во влажном так и сухом материале. В высохшей моче инфицированных животных коксиеллы выживают в течении нескольких недель, в сухих фекалиях до двух лет, в высохшей крови, взятой от больных животных, сохраняются 180 дней, в фекалиях иксодовых клещей и мертвых клещах многие месяцы. В стерильной водопроводной воде - до 160 дней. В стерильном молоке коксиеллы сохраняют жизнеспособность до 257 дней.

В свежем мясе при хранении в леднике коксиеллы выживают не менее 30 дней, в засоленном - до 80 дней и более, в масле и сыре при 4 градусах остаются жизнеспособными более года.

На шерсти коксиеллы выживают в зависимости от температуры хранения - от 4 до 16 месяцев. Возбудитель весьма устойчив к ультрафиолетовому облучению (до 5 часов) и повышенной температуре (часовое нагревание до 80-90 градусов не обеспечивает его гибели). Кипячение убивает коксиелл в течение одной минуты.

Низкие температуры (от -4 до -70 градусов) создают особо благоприятные условия для сохранения риккетсий, а сочетание с лиофильным высушиванием на белковой среде обеспечивает «консервацию» их на протяжении многих лет. При этом вирулентные свойства коксиелл не изменяют вовсе или, снижаются в процессе хранения, но довольно быстро восстанавливаются в благоприятных условиях.

Обезвреживание коксиелл требует применения более высоких концентраций химических веществ и большей их экспозиции, чем для других риккетсий. Применяя 3-5 % раствор фенола, 3 % раствор хлорамина, 2 % раствор хлорной извести, последний вызывает гибель коксиелл в течение 2-5 минут. В ветеринарной практике для дезинфекции помещений и предметов ухода за скотом применяют 2 %-ные растворы NaOH и формальдегида, 3 % раствор креолина, раствор хлорной извести с 2 %-ым содержанием активного хлора.

Устойчивость коксиелл Бернета к воздействию факторов внешней среды обуславливает сохраняемость их при транспортировке с загрязненным сырьем животного и растительного происхождения на любые расстояния, и создает предпосылки возникновения заболеваний лихорадкой Ку - в местностях, весьма отдаленных от энзоотических районов.

Лабораторная диагностика Ку-риккетсиоза.

Она проводится согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностики лихорадки-Ку», утвержденным Главным управлением ветеринарии Государственного агропромышленного комитета СССР 3.06.86 г. № 432-5.

При подозрении на наличие лихорадки-Ку у сельскохозяйственных животных, а также при появлении в хозяйстве заболевания неизвестной этиологии, с признаками, напоминающими лихорадку-Ку, поводят лабораторную диагностику путем исследования клещей и грызунов.

Материал для исследования.

Объектами лабораторного исследования могут быть: при жизни животного - кровь, взятая из яремной вены (2-1,5 мл), клещи, собранные с животных, на пастбище, мелкие зверьки, грызуны (полевки, крысы), или их свежие трупы, экссудат из матки и влагалища, плацента абортировавшего животного, от погибших или убитых с диагностической целью сельскохозяйственных животных, части пораженного легкого, головного мозга, селезенки, регионарных лимфоузлов, паренхимы вымени, кровь.

Материал отправляют в специализированную лабораторию в герметизированных контейнерах, поддерживая температуру в контейнерах +4 0С.

Лабораторная диагностика лихорадки-Ку заключается в:

выявлении специфических антител в сыворотке крови сельскохозяйственных животных и грызунов в реакции длительного связывания комплемента (РДСК) с использованием антигена из возбудителя фазы 1 лихорадки-Ку (ретроспективная диагностика);

обнаружении и идентификации возбудителя этой болезни в патологическом материале грызунов и сельскохозяйственных животных, а также от клещей, собранных в природном очаге и от животных, путем постановки биологической пробы и микроскопии мазков.

Серологическая диагностика лихорадки-Ку

Ее проводят согласно «Методическим указаниям по серологической диагностике лихорадки-Ку животных», утвержденным Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 14.09.84 г. № 115-6а.

Серодиагностика основана на проведении РДСК, а также разработаны РСК, РП, РА, РИФ (непрямой метод).

Биологическая проба

Биопробу проводят или на морских свинках с живой массой 300-400 г или белых мышах с живой массой 8-10 г или 6-7-дневных куриных эмбрионах (КЭ).

Заражение морских свинок

Для каждого исследуемого материала берут по 4 морских свинки. Приготовленный материал вводят внутрибрюшинно по 2,5 мл. продолжительность инкубационного периода может колебаться от 3-5 дней до 2-4 недель. Морских свинок ежедневно термометрируют. Болезнь характеризуется повышением температуры до 40,5 0С и выше, угнетением общего состояния и потерей аппетита. Для получения четкой реакции проводят 3-5 «слепых» пассажей. На 2-3 день после повышения температуры проводят диагностический убой морских свиной. Из паренхиматозных органов готовят мазки-отпечатки и исследуют согласно пункта 2.10.5. Патологоанатомические изменения характеризуются признаками пневмонии, дегенеративными изменениями печени, на селезенке обнаруживают фибринозный налет.

В случае отсутствия клинических признаков заболевания морских свинок через 30 дней после введения исследуемого материала, берут кровь и сыворотку исследуют на наличие специфических антител. Постановку реакции проводят согласно «Методическим указаниям по серологической диагностике лихорадки Ку животных».

Заражение белых мышей

Для каждой исследуемой пробы материала берут не менее 4-х белых мышей. Исследуемый материал вводят внутрибрюшинно по 0,5-1,0 мл. Наблюдение ведут в течение 12 дней. Мыши, павшие в течение 3 дней после введения материала, утилизируются. Мышей, павших через 4 и более дней и оставшихся в живых, по истечении 12 дней убивают под эфирным наркозом и вскрывают с соблюдением асептики. Для микроскопии готовят мазки-отпечатки из селезенок. При патологоанатомическом исследовании обнаруживаются признаки пневмонии, увеличение селезенки и печени.

В качестве лабораторных животных можно использовать белых крыс, хомячков, сусликов и кроликов.

Если заражать лабораторных животных внутривенно или в переднюю камеру глаза (после предварительно анестезии) Ку-риккетсиоз протекает бессимптомно. После убоя животных риккетсий обнаруживают в почках, селезенке (Т.С. Костенко, 1989 г.).

Заражение развивающихся куриных эмбрионов

При использовании КЭ исследуемый материал вводят в желточный мешок не менее 4 эмбрионов 6-7 дневного, по 0,3-0,5 мл и наблюдают в течение 12 дней. Гибель эмбрионов на 1-3 сутки после введения материала считается неспецифической и они утилизируются. Погибших эмбрионов через 4 и более дней, оставшихся в живых через 12 дней вскрывают в асептических условиях, извлекают желточные мешки и из них готовят мазки-отпечатки для микроскопии.

Микроскопическое исследование мазков на наличие возбудителя Ку - лихорадки

Проводят с использованием окраски мазков по методу Здродовского. Высушенные на воздухе мазки фиксируют обычным способом на пламени и окрашивают основным фуксином Циля, разведенным бидистиллированной водой из расчета 15-18 капель фуксина на 10 мл воды. Мазки окрашивают в течение 5 минут, затем фуксин смывают водой, препарат погружают на 2-3 секунды в 0,5 % раствор лимонной кислоты и промывают водой. Затем в течение 15-30 секунд окрашивают 0,5 % водным раствором метиленовой сини и снова промывают водой, мазок высушивают фильтрованной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе при увеличении 7 * 90. При этом риккетсии имеют вид палочек или кокков красного цвета на синем фоне.

При отсутствии возбудителя в мазках в первом пассаже проводят 3 последовательных пассажа.

Дифференциация возбудителя Ку-лихорадки

При дифференциации исключают хламидиоз, бруцеллез, пастереллез и листериоз, которые могут протекать самостоятельно и в виде смешанных инфекций.

Диагноз на Ку-лихорадку считают установленным при получении одного из следующих результатов:

выявлении специфических антител в сыворотке крови сельскохозяйственных животных и грызунов в реакции длительного связывания комплемента с использованием антигена из возбудителя фазы I лихорадки Ку (ретроспективная диагностика);

обнаружении и идентификации возбудителя этой болезни в патологоанатомическом материале грызунов и сельскохозяйственных животных, а также от клещей, собранных в природном очаге и от животных, путем постановки биологической пробы и микроскопии мазков.

Окончательный диагноз

Окончательный диагноз на лихорадку Ку устанавливается на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных с учетом лабораторных исследований.

Диагностическая оценка результатов исследований

В случае выделения возбудителя от клещей и грызунов или обнаружении специфических антител в сыворотке крови морской свинки при постановке биопробы местность (регион) считают природным очагом Ку-лихорадки, а при выделении возбудителя из организма сельскохозяйственных животных (ферму) считать неблагополучной по этой болезни.

В природном очаге и в неблагополучное хозяйстве проводят мероприятия согласно «Временной инструкции по профилактике и ликвидации Ку-лихорадки сельскохозяйственных животных».

Сроки исследования.

Сроки исследований: биопробы на морских свинках - до 30 дней, на белых мышах и куриных эмбрионах - до 13 дней.

Иммунитет, средства специфической профилактики и терапия

Иммунитет изучен недостаточно. У зараженных животных (коровы, овцы и др.). Отмечено длительное (свыше 2-х месяцев) носительство возбудителя. В этот период возможны ре- и суперинфекции, развивается гиперчувствительность замедленного типа.

После выздоровления формируется напряженный иммунитет.

В ветеринарной практике вакцин и сывороток, пригодных для применения пока не разработано. В медицине хороший эффект дает иммунизация живой вакциной М-44 (предложены Здродовским П.Ф. и Гениг В.А., 1960-1968 гг.). Иммунизируют как животных, так и людей, подвергающихся опасности заражения.

Для серологической диагностики в РДСК используется сухой антиген из риккетсий Бернета фазы I.

Животных с выраженными симптомами Ку-лихорадки, положительно реагирующих в РДСК, а также без клинических признаков, но с повышенной температурой, в течение двух и более дней лечат тетрациклином и его производными. Внутрь дают хлортетрациклин, внутримышечно - окситетрациклин и тетрациклин из расчета 25-30 мг/кг массы животного 2-3 раза в сутки до выздоровления и после него еще три дня. Одновременно проводят симптоматическое лечение.

Возбудитель риккетсиозного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота

Инфекционный кератоконъюнктивит, инфекционный кератит, инфекционное воспаление глаз.

Остро протекающее заболевание с поражением роговицы и конъюнктивы глаза преимущественно крупного рогатого скота.

Впервые риккетсиозный кератоконъюнктивит описал Д. Коулс (1931) в Южной Африке и назвал возбудителя Chlamydozoon conjunctivae.

Позднее возбудитель был более детально изучен и отнесен к роду Rickettsia, виду R. conjunctivae.

Краткие эпизоотологические данные

В 1953-1954 гг. в бывшем СССР был диагностирован данный риккетсиоз (В.П. Панин и Л.А. Дорофеев). К нему восприимчивы крупный и мелкий рогатый скот, верблюды, свиньи, лошади, птицы, из лабораторных животных восприимчивы только кролики, человек не восприимчив. Наиболее чувствительны телята в возрасте от 3 месяцев до 1,5 лет и ягнята старше 15-дневного возраста.

Источник возбудителя - больные животные и риккетсионосители, выделяющие его с секретом конъюнктивы и слизью из носа.

Основной путь передачи - воздушно-капельный, контактный или при участии насекомых, механических переносчиков (мухи, клещи и др.). Болезнь характеризуется исключительно быстрым распространением, особенно при содержании животных большими группами, регистрируют ее во все времена года, но чаще весной и летом, заболевание имеет тенденцию к стационарности. На степень поражения животных отрицательно влияют плохие условия их содержания, недостаток витамина А.

Патогенез

риккетсии проникают в строму роговицы и оказываются в межклеточном веществе среди слегка дезорганизованных коллагеновых фибрилл, что приводит к развитию стромального кератита. Этому способствует эндотоксин, вырабатываемый микроорганизмами, инфекционно-аллергическая реакция замедленного типа (В.А. Адо, 1985, Е.А. Кирьянов, 1988).

Основные клинические признаки

Инкубационный период при инфекционном кератоконъюнктивите от 2 до 12 дней. Основной признак болезни - конъюнктивит, чаще односторонний. Из больного глаза появляются истечения, веки опухают, возникает реакция на свет (светобоязнь). На поверхности отечной конъюнктивы мелкая зернистость. Воспаление может распространиться на роговицу, вызывая кератит. Роговица мутнеет, приобретает желтоватый оттенок, в ней образуется абсцесс, температура тела повышается, состояние животного угнетенное, аппетит понижен. Затем абсцесс вскрывается и образуется язва - язвенно-некротический кератит, может отмечаться полное прободение роговицы. Появляются слизисто-гнойные истечения. Через 8-10 дней животные, обычно, выздоравливают, но заболевание может продолжаться 20-35 дней. После выздоровления в глазу образуется рубец (бельмо).

Характеристика возбудителя

Морфология и тинкториальные свойстваconjunctivae это мелкие полиморфные организмы, палочковидные, кольцевидные, подкововидные, бобовидные, но чаще кокковидные формы, размер 0,5-3 мкм.

По Романовскому-Гимзе окрашиваются в красно-фиолетовый цвет (фиолетовые с красными гранулами), по Здродовскому - в красный цвет. Обнаруживают риккетсий как в клетках (внутриклеточный паразитизм), так и вне их.

Культуральные свойства

Культивирование проводят в РКЭ. Заражают 5-6 дневные куриные эмбрионы и желточный мешок. В процессе культивирования риккетсий проводят 4-6 «слепых» пассажей, используя для этого отмытые в стерильном физрастворе, растертые и суспензированные оболочки желточных мешков. В положительном случае отмечают гибель или отставание в развитии (по сравнению с контрольными) зараженных эмбрионов.

Устойчивость

К факторам внешней среды и химическим веществам не высокая. В 0,85 % растворе NaCl при температуре 20-22 градуса риккетсии сохраняют свою вирулентность 24 часа.

На шерсти овец возбудитель погибает через 96 часов, 5 % раствор колларгола инактивирует их за 15 минут.. conjunctivae чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда.

Лабораторная диагностика

Патматериал - соскобы с конъюнктивы верхнего века и роговицы пораженных глаз больных животных, слизь из носа, слезная жидкость на второй - пятый день заболевания. Исследуют только свежий материал. В случае длительной транспортировки материал замораживают при температуре -5-10 0С и перевозят в термосе со льдом.

Лабораторная диагностика риккетсиозного кератоконъюнктивита включает:

. Микроскопический метод,

. Выделение культуры риккетсий на РКЭ,

. Биологический метод.

Микроскопический метод:

) Световая микроскопия: трехкратно с интервалом 1-2 дня микроскопируют препараты-мазки из патматериала, окрашенные методами - Романовского-Гимзе или Здродовскому (технику окраски см. в разделе «Общая характеристика патогенных риккетсий», «Тинкториальные свойства»).

При окрашивании по Романовскому-Гимзе риккетсии окрашиваются в красно-фиолетовый цвет (фиолетовый с красными гранулами), по Здродовскому - в красный цвет.

Люминисцентная микроскопия: для обнаружения риккетсий под люминисцентным микроскопом применяют метлд флюорохромирования. Препарат фиксируют в метаноле 5 минут, обрабатывают раствором акридинового оранжевого (1:3 000, рН 3,8), промывают дистиллированной водой, высушивают и просматривают под иммерсионным объективом с использованием не флюоресцирующего иммерсионного масла (светофильтры - СЗС-7, Ж-1, БС-8 и КС-18).

Риккетсии флюоресцируются зеленым и красным цветом и четко выделяются на темном фоне препарата.

Выделение культуры на РКЭ:

См. пункт 3.6. Культуральные свойства.

Биологический метод:

Для выявления и определения патогенности риккетсий - возбудителей кератоконъюнктивита - заражают бычков в возрасте 2-5 месяцев или кроликов, внося материал в глаз животного. Суспензию (1:5) готовят из исходного патматериала или из эмбриональной культуры. Заболевание у бычков проявляется через 7-12 суток в виде кератоконъюнктивита и продолжается 8-10 суток и дольше. У кроликов заболевание проявляется на 2-4 сетки в 90 % случаев. При вскрытии их, помимо воспалительных явлений в области инфицированного глаза, выявляется очаговое катаральное воспаление легких.

Серологическая диагностика риккетсиозного кератоконъюнктивита не разработана.

Риккетсиозный кератоконъюнктивит необходимо дифференцировать от конъюнктивитов, вызываемых хламидиями, телязиями, пастереллами, а также травматических повреждений.

Диагноз ставится на основании эпизоотологических, клинических данных и подтверждается лабораторными исследованиями (обнаружение возбудителя при микроскопии мазков).

Продолжительность лабораторных исследований - 1,5 месяца.

Иммунитет, средства специфической профилактики и терапия

У переболевших риккетсиозным кератоконъюнктивитом животных образуется продолжительный иммунитет - до года.

Средства специфической профилактики не разработаны.

Больных животных изолируют в темное помещение и лечат: промывание глаз раствором фурацилина (1:5000), глазными каплями (0,5 % раствор сульфата цинка и 3 % раствор борной кислоты), вводят новокаин-хлортетрациклиновую мазь (новокаин 5,0, хлортетрациклин - 5,0, вазелин - 30,0) и др., синтомициновую эмульсию, 5 % протаргол, мази кортикостероидов в антибиотиками, растворы и мази альбуцида.

риккетсия кератоконъюнктивит скот эперитрозооноз

Возбудитель анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота

Анаплазмоз - трансмиссивное заболевание крупного и мелкого рогатого скота, а также других домашних и диких животных, протекающее осро или хронически с признаками остро выраженной анемии, перемежиющейся лихорадкой, нарушением работы сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта.

Возбудителем анаплазмоза крупного рогатого скота является Anaplasma marginale (Theiler, 1910) и A.centrale (Theiler, 1911), у овец и коз A.ovis (Lestoguard, 1924).

Краткие эпизоотологические данные

Возбудители анаплазмоза широко распространены среди домашних и диких животных, паразитируют в эритроцитах парнокопытных (Bovidae, Cervidae, Camelidae, Caprinae, Antilopinae). Болезнь зарегистрированы в Европе, Азии, Африке, Австралии и Америке. Анаплазмоз регистрируют на территории Республики Беларусь. По данным Главного управления ветеринарии в 1996 году выявлено 12 неблагополучных пунктов, где заболело 747 голов крупного рогатого скота.

К А. marginale восприимчивы лоси, северные олени, овцы, козы, зебу, косули, антилопы и буйволы.

К A. ovis - овцы, козы, архары, муфлоны, сайгаки, антилопы, косули, лоси, олени, что дает возможность отнести анаплазмоз к природно-очаговым заболеваниям. Зебувидный скот (молодые животные) более восприимчив, чем домашние. Наиболее подвержены заболеванию стельные и высокоудойные коровы.

Источник возбудителя - больные животные и паразитоноситель. Это заболевание трансмиссивное: передается кровососущими членистоногими и насекомыми; это иксодовые, реже аргазовые клещи, мухи, слепни, комары, у овец - овечья кровососка.

Анаплазмы передаются трансфазно, трансовариально и в пределах одной половозрелой фазы клеща при прерывистом питании. Возможен механический перенос возбудителя.

Переболевшие животные остаются паразитоносителями в течение всей жизни. Источником анаплазм могут быть и дикие парнокопытные.

Анаплазмы могут переноситься от больных здоровым животным при взятии крови, различных операциях, выполняемых одним и тем же инструментом.

Возможно внутриутробное заражение.

Существует сезонность анаплазмоза, он регистрируется летом и осенью, редко зимой. Заболевание овец регистрируется с апреля по октябрь. Его часто диагностируют совместно с бабезиозами, тейлериозом и эперитрозоонозом. Тяжело протекает при смешанных инвазиях в гельминтозами, а также в сочетании с инфекционными болезнями. В зимнее время анаплазмоз диагностируется чаще у животных, находящихся в условиях, снижающих резистентность: некачественное кормление, йодная, кобальтовая или витаминная недостаточность.

Анаплазмозу характерна стационарность. Заболеваемость 40-50 %. Летальность достигает 40 %.

Патогенез

Развитие болезненного процесса начинается с внедрения анаплазм в эритроциты и выделение ими продуктов обмена. В результате нарушаются физиологические функции эритроцитов и их гемопоэз. Одновременно изменяется деятельность центральной нервной системы, возникает патология внутренних органов. Организм реагирует на внедрение анаплазм мобилизацией клеточных и гуморальных механизмов с образованием антител против возбудителя, что приводит к усилению эритрофагоцитоза. Продолжительность жизни пораженных эритроцитов в среднем около 20 дней, в то время как здоровые эритроциты живут около 90-120 дней. Количество эритроцитов и гемоглобина у тяжелобольных животных сокращается в 2,5 раза. В организме наступает гипоксемия и гипоксия, что приводит к еще большему нарушению деятельности центральной нервной системы, поэтому у некоторых животных развиваются парезы задних конечностей и нарушения координации движения. Прогрессирует исхудание. Вследствие нарушения деятельности вегетативной системы развивается атония кишечника. При угнетении иммунобиологических механизмов снижается резистентность организма, и тогда процесс часто заканчивается летально.

Основные симптомы и патологоанатомические изменения

Инкубационный период от 10 до 175 суток.

У крупного рогатого скота анаплазмоз протекает остро и хронически. При остром течении повышается температура тела до 41, слизистые оболочки становятся бледными до цвета фарфора - развивается прогрессирующая анемия (количество эритроцитов снижается до 1,5-2 млн/мм крови, гемоглобина - 2-4 %), иногда развивается желтушность. Нарушается сердечно-сосудистая деятельность и дыхание, часто появляется кашель. Животные быстро худеют, развивается атония кишечника. Могут быть аборты.

При микроскопии устанавливают анизацитоз, пойкилоцитоз и полихромазию.

Хроническое течение характеризуется менее выраженными симптомами и длиться 20-30 дней.

У овец анаплазмоз протекает остро, хронически и бессимптомно, в основном с теми же симптомами как и у крупного рогатого скота. Наблюдается уменьшение количества и качества шерсти, могут быть парезы.

Кровь у крупного и мелкого рогатого скота бледно-красная, водянистая. Больные животные отстают от стада, много лежат, стремятся от солнца в тень. Постепенно развивается слабость, упадок сил, иногда наступает смерть при явлениях комы.

При вскрытии отмечают сильное истощение трупов, слизистые анемичны, иногда с оттенком желтушности. Скелетная мускулатура бледно-розового цвета, кровь светлая и жидкая. Сердечная мышца дряблая, под эпикардом полосчатые и пятнистые кровоизлияния. Селезенка увеличена в 2-3 раза, с кровоизлияниями. Печень в большинстве случаев увеличена, с тупыми утолщенными краями, желтушна и пятниста, желчный пузырь наполнен густой желчью.

При смешанных заболеваниях изменения в трупе соответствуют тем болезням, которые вызвали смерть животного.

Характеристика возбудителя

Морфология и тинкториальные свойства

В мазках крови анаплазмы имеют округлую форму, могут быть палочковидные, кольцеобразные, размер 0,2-2,2 мкм, располагают по краю эритроцитов. В начале болезни они могут принимать треугольную форму или мелких точек. Паразиты могут образовывать скопления (микроколонии) 1-10 паразитов и более.

Грамотрицательные, хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе в темно-красный цвет. Можно окрашивать азур-эозином и ускоренным методом по Щуренковой.

Устойчивость

Анаплазмы устойчивы к низким температурам, при замораживании до минус 70 0С и минус 196 0С они сохраняются годами, но быстро гибнут при плюс 50 0С.

Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика проводится согласно «Инструкции по борьбе с анаплазмозом крупного и мелкого рогатого скота», утвержденной 31 июля 1970 года, приложения № 1 (Антонов Б.И., 1987).

Материалом для исследования служит кровь больного животного, а также сыворотка крови (3-5 мл).

Лабораторная диагностика включает:

. Микроскопический метод - обнаружение анаплазм в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе, азур-эозином или ускоренным методом Щуренковой;

. Серологический метод - РСК.

Анаплазм окрашивают в темно-красный цвет, они имеют округлую форму (похожи на точки), расположены по периферии эритроцитов. Размеры 0,2-2,2 мкм.

Степень пораженности эритроцитов бывает различной - от незначительной до 50 % и более зараженных эритроцитов. В отличии от телец Жолли анаплазмы обычно мельче и менее интенсивно окрашены.

Не следует смешивать анаплазм с базофильной зернистостью эритроцитов, которая в большинстве случаев проявляется множественностью разнообразных форм включения в одном эритроците.

В сомнительных случаях в лабораторию направляют сыворотку крови в количестве 3-5 мл для постановки РСК, которая проводится согласно «Методике постановки РСК для диагностики анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота». Утверждена 29.09.1971 г.

Диагноз на анаплазмоз ставят на основе эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторного исследования.

Анаплазмоз следует дифференцировать от тейлериоза, пироплазмоза, бабезиоза, франсаиеллеза, лептоспироза, у овец дополнительно от эперитрозооноза.

Диагноз на анаплазмоз считают установленным в одном из следующих случаев: при обнаружении возбудителя в мазках крови методом световой микроскопии.

При дифференциации необходимо учитывать морфологию возбудителя. При анаплазмозе, в отличие от других кровопаразитарных болезней, отсутствуют кровавая моча и в большинстве случаев желтушность видимых слизистых оболочек. Несмотря на очень значительное уменьшение количества эритроцитов, подъем температуры у животных проявляется в виде лихорадки постоянного или перемежающего типа, аппетит обычно сохраняется до конца болезни, но животные сильно худеют, часто до полного истощения.

При лептоспирозе резко выраженная желтушность слизистых оболочек и кожи, кратковременная лихорадка, геморрагический диатез, некроз слизистых оболочек кожи, гемоглобинурия, что подтверждается лабораторным исследованием.

Иммунитет, средства специфической профилактики и терапия

Ведущую роль в предохранении организма от анаплазм играет клеточный иммунитет. Гуморальные антитела не имеют большого значения в предохранении от анаплазм.

Иммунитет не стерильный и поддерживается присутствием паразитов в крови животных.

Для лечения применяют антибиотики тетрациклинового ряда, которые растворяют в 1-2 % растворе новокаина, 4-6 дней подряд, доза 5-10 тыс. ЕД/кг массы тела животного.

Применяют также сульфаниламиды, показано введение диамидина.

Необходимая патогенетическая терапия: введение микроэлементов (сернокислая магнезия, сернокислая медь, хлористый кобальт), витаминов (В12), сердечные средства - кофеин, камфора и другие.

В эпизоотической зоне ведут борьбу с клещами. Вновь вводимых в хозяйство животных следует исследовать методами серодиагностики.

Возбудитель эперитрозооноза свиней

Эперитрозооноз - это кровопаразитарная болезнь свиней всех возрастов, протекающая остро или хронически, характеризующуяся желтушностью, анемией, затрудненным дыханием, слабостью, лихорадкой, некрозами, отставанием в росте и развитии.

Впервые болезнь описана Doyle в Штате Индиана в 1933г., как " рикеттсие подобная или анаплазмаподобная болезнь у свиней " (Doyle, 1932). Сплиттер и Вильямсон ( 1950 г.) описали организм, вызывающий желтушность у свиней --- Eperythrozoon suis и других подобных возбудителей, вызывающих эперитрозооноз -- у КРС -- E. wenyonii и у овец - E. оvis.

Различные виды возбудителей эперитрозооноза также были индентифицированы у этих животных в 1977 г. (Gothe и Kreier) патогененность и клиническое проявление демонстирировались только -- E. suis (у свиней), E. wenyonii (у КРС), E. оvis (у овец) и E. coccoides (у мышей).

Краткие эпизоотологические данные

Эпиритризооноз - болезнь видоспецифическая. Ее вызывает только Eperythrozoon suis и наблюдается она только у домашних свиней.

Эперитрозооноз регистрируется на всех континентах. Кроме свиней болеют грызуны и жвачные. Болезнь зарегистрирована в Англии, Германии, Румынии, Чехии, Словакии, Франции, Югославии, Сардинии, Канаде, Тайване, Польше.

К болезни восприимчивы свиньи всех возрастов. Особенно предрасположены к заболеванию поросята-отъемыши и поросята в течении нескольких дней после кастрации. Поросята болеют чаще в возрасте 1-14 дней и до 3-6 мес.

Источником возбудителя инфекции являются больные животные.

Во внешнюю среду возбудитель выделяется с секретами организма, содержащих кровь.

Факторами передачи являются предметы ухода, подстилка, пол, кормушки, корма загрязненные кровью, а также различный инструмент при ветеринарных обработках.

Заражение происходит алиментарным, контактным, внутриутробным и трансмиссивным путем (клещи, комары, мухи-жигалки, вши).

Для эперитрозооноза характерна стационарность, что можно объяснить длительным носительством возбудителя в организме переболевших и клинически здоровых животных.

Выраженной сезонности нет, так как больные выявляются в течение всего года, но большинство случаев заболевания приходится на летний период. У свиней болезнь чаще наблюдают в период массовых опоросов.

Клинические признаки: анемия, лихорадка, желтуха, некрозы будут наблюдаться только в ослабленном организме животного. Стресс факторы, неудовлетворительные условия содержания и кормления, хронические генерализованные инфекции предрасполагают к клиническому проявлению болезни.

Эперитрозооноз осложняет течение сопутствующих ему болезней, в свою очередь ряд заболеваний обуславливающих возникновение рецидивов. Отмечена интерференция эпиритрозоонов с анаплазмами, бабезиями и другими простейшими.

Заболеваемость зависит от имунного статуса поголовья и достигает 30% и более. Смертность менее 1%.

Патогенез

Эперитрозооны обладает тропизмом к эритроцитам, тромбоцитам и лейкоцитам. Вобудитель может располагаться отдельно или цепочкой на внешней оболочке эритроцита, а также может находиться внутри эритроцита.

Свободные микроорганизмы замечены только в плазме крови. Эти деформированные эритроциты удаляются, а затем гемолизируются в селезенке. В крови нарушается кислотно-щелочное равновесие, развивается ацидоз. В острых случаях может наблюдаться генирилизованная гемолитическая желтуха.

Эпиритризооноз вызывает аутоиммунную гемолитическую анемию, ассоцированную с холодной агглютинацией. В процессе взаимодействия Eperythrozoon suis с поверхностью (мембраной) эритроцита - изменяется структура мембраны заканчивающаяся освобождением замаскированных антигенов или модификацией уже существующих антигенов - то есть чуждый ответ иммунной системы организма.

После прилипания микроорганизма к мембране эритроцита, производятся аутоантитела как часть защитного механизма, они нападают на эритроциты инфицируя животное.

Присутствие микроорганизмов в плазме приводит к микроагглютинации эритроцитов, в тех частях тела, где ниже температура в частности на ушах, хвосте и конечностях. При недостаточном кровотоке происходит посинение ушей, в результате чего, позднее появляются ишемии. Клинически это может проявляться в виде некрозов.

Основные симптомы и патологоанатомические изменения

У эксперементально инфицированных и заболевших свиней инкубационный период длится в среднем 7 дней (но может быть от 2 до 26 дней), после подсадки зараженных клещей от 8 до 90 дней.

Эперитрозооноз может протекать остро и хронически.

Может быть субклиническая, генитальная и латентная формы.

Инкубационный период зависит от вирулентности E. suis, возраста и состояния иммунной системы организма, а также от дозы заражения, условий содержания и кормления животных. Наиболее характерные для эперитрозооноза свиней клинические признаки проявляются у поросят сосунов между рождением и 1-м днем жизни, повышение температуры тела на 1 - 3 день после заражения в пределах 40,0 - 41,5 °С. У больных поросят первым клиническим признаком является кратковременная (1-3 дня) лихорадка до 41,5 °С, бледность кожи, апатия, анемия или периодически проявляющаяся желтизна. Эти признаки исчезают через несколько дней. Клинические признаки могут проявляться не у всех поросят приплода. Через несколько дней появляются изменения в крови. Нарушения в работе печени - увеличение выделения желчи.

У поросят на откорме наблюдается апатия, кратковременная лихорадка, затрудненное дыхание (одышка), потеря аппетита, анемия, иногда желтуха. У больных животных наблюдают слезотечение, гиперемия, а затем бледность слизистых оболочек, иногда желтушность, периодическую диарею, запоры, иногда клонические судороги. Больные поросята погибают при явлениях комы, гипотермии и острой анемии.

Клинические признаки при остром течении: бледность, лихорадка до 42°С, желтушность, а также цианоз конечностей, особенно в области хрящевой ткани ушей. Указанные процессы ведут к ослаблению и гибели молодых особей.

Классическая форма желтухи встречается очень редко. Анорексия (диареи), апатия, затрудненное дыхание (одышка) встречаются в зависимости от степени анемий. У свиней снижаются привесы.

Мраморность или обескровливание ушей встречается из-за ухудшения кровоснабжения в микроциркуляторном русле ушей. Характерным признаком так называемой холодной агглютинации при остром течении болезни, является темно-красное окрашивание конечностей и кончиков ушей. Это происходит из-за микроагглютинации и тромбоцитоза в капиллярах кровеносного русла. В некоторых случаях отмечается цианоз, особенно у поросят после ветеринарно-зоотехнических мероприятий - кастрации, отьем. Также у поросят-сосунов, отъемышей и на откорме наблюдают анемичность всей области уха, хвоста и конечностей ног. Некроз ушных раковин и больших областей хрящевой ткани ушей может происходить в результате длительного воздествия Eperythrozoon suis или же в следствие острого течения болезни. Некрозы могут быть не только на верхушках ушей, но и на боках, в области живота. Вылеченное животное (стадо) может снова заболеть в результате ослабления иммунитета. Реинфекция воможна в любое время года. При реинфекциях клинические признаки слабо выражены.

Хроническое течение болезни характеризуется бледностью и некоторыми аллергическими реакциями кожи в форме «крапивницы». Характерным признаком является омертвление верхушек ушей. При хроническом течении болезни у свиней в старших группах откорма поражения выражены на ушах, на боках, на животе между передними и задними конечностями. У свиней старших групп изменения на боках размером с маленькую тарелку. У заболевших поросят часто возникают сопутствующие вторичные инфекционные болезни из-за ослабления иммунной системы. Некоторые свиньи на откорме проявляют апатию, потерю аппетита, лихорадку 40,5 - 41,5 °С, затрудненное дыхание и снижение привесов.

У свиноматок клинические признаки появляются на 3 - 4 день после опороса, и характеризуются анорексией, лихорадкой до 42°С и протекает в грудной или генитальной форме в течение 1 - 3 дней. Эти свиньи характеризуются угнетенным молокообразованием и молокоотдачей и ненормальным или отсутствием материнского поведения. Начало клинических признаков может приходиться и на послеродовой период. После нескольких дней после заражения у свиней наблюдается лихорадка в течении 1-3 дней и потеря аппетита, угнетено молокообразование.

При генитальной форме у свиней наблюдают репродуктивные проблемы: нерегулярность циклов, плохая оплодотворяемость, аборты, рождение мертвых или слабых (нежизнеспособных) поросят. Эти признаки наблюдаются в серологически позитивных стадах. В стадах инфицированных Eperythrozoon suis 65% поросят после отьема в течении 7 дней находятся без видимых клинических признаков болезни. Проблемы с нерегулярностью половых циклов (анэструс) может достигать у 60% поголовья свиней.

При субклинической форме уровень гемоглобина понижен, температура тела субфебрильная, молодые животные болеют тяжелее. У них наблюдают угнетение, потеря аппетита, лихорадка, слабость, одышку, анемичность слизистых.

Латентная форма клинически не проявляется.

Патологоанатомические изменения в основном не характерны и зависят от сопутствующих инфекций. У поросят отмечают истощение, желтушность кожного покрова, иногда за ушами дерматит. При вскрытии наблюдают увеличение селезенки, лимфоузлов и стенки (оболочки) желудка, в выстилающих кровеносных сосудах наблюдается желтушность. Слизистые и серозные оболочки, подкожная клетчатка желтушные. Желтушность может быть и в других органах. Печень желтая или желто-коричневая. Иногда наблюдают гидроторакс, гидроперикардит и асцит. Под серозной оболочкой почек и мочевого пузыря возможны петехии. Содержимое желудка и кишок желтоватой окраски.

Гистопатологически обнаруживают увелечение содержания гемосидерина в Купферовских клетках печени, а также в клетках сетчато-клетчатого слоя желудка.

Характеристика возбудителя

Морфология и тинкториальные свойства.

Возбудитель эперитрозооноза полиморфен, может иметь округлую, овальную, палочковидную, гантелевидную, кольцевидную формы, могут встречаться в виде запятой и иметь зернистость. Размер от 0,2 до 2 мкм, у скоплений от 1,0 до 2,5 мкм. В препаратах из крови лежат индивидуально или цепочкой на внешней оболочке эритроцита и могут находиться внутри эритроцита. При лихорадочном состоянии можно обнаружить свободно лежащие бактерии.

Эперитрозооны паразитируют на эритроцитах, тромбоцитах, лейкоцитах и имеют в мазках крови окрашенных по Романовскому - Гимзе вид нежных розоватых или розовато-фиолетовых полиморфных образований. По Здродовскому эперитрозооны окрашиваются в розово-красный цвет.

Лабораторная диагностика.

Для лабораторной диагностики нужна сыворотка крови, или цельная кровь стабилизированная гепарином или другим антикоагулянтом.

Диагноз на Eperythrozoon suis ставится комплексно на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений. Решающим в постановке диагноза является лабораторная диагностика. Лабораторная диагностика включает:

Микроскопический метод - приготовление мазков крови, окраска по Романовскому - Гимзе и Здродовскому, микроскопия с целью обнаружения эперитрозоонов;

Серологический метод - обнаружение специфических антител в сыворотке крови с помощью РСК, ИФА, идентификация антигена в ИФА;

Молекулярно-генетический метод - полимеразная цепная реакция (ПЦР);

Биологический метод - заражение восприимчивых к эперитрозоонозу животных;

Гематологические исследования - выведение лейкограммы, определение гемоглобина, количества эритроцитов, уровня гематокрита и железа в крови.

Гистологический метод - проводят гистологическое исследование печени, почек и селезенки с целью установления скоплений гемосидерина.

Микроскопический метод.

У больных и подозрительных по заболеванию животных берут кровь из периферических сосудов (ухо, кончик хвоста, иногда глазной синус), не допуская гемолиза эритроцитов. Кровь стабилизируют Трилоном Б, гепарином, лимоннокислым натрием. Лучшие результаты животных получают при исследовании крови от животных с острым течением эперитрозооноза. Готовят мазки крови по общепринятой методике сразу после взятия крови. Предметные стекла должны быть идеально чистыми и обезжиренными. Температура крови должна быть 37 ?С, иначе эритроциты агглютинируются из-за холодной агглютинации, затрудняющей выявление Eperythrozoon suis в мазках. После приготовления мазков крови их высушивают и фиксируют химическим способом: метиловым спиртом - 5 минут, этиловым спиртом - 30 минут, жидкостью Никифорова (этиловый спирт ректификат 96? и эфир для наркоза в соотношении 1:1) - 30 минут.

Мазки окрашивают по Романовскому - Гимзе или Здродовскому.

Техника окраски по Романовскому - Гимзе.

На фиксированный мазок наносят краску разведенную дистиллированной водой (рН 7,0 - 7,2 ) в соотношении 3 капли краски на 2 мл воды, окрашивают в течение 30 - 45 минут. Промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют при общем увеличении в 900 - 1800 раз.suis окрашивается в голубой цвет с различными оттенками в виде полимофных микроорганизмов на мембране эритроцита. Эритроциты розовые.

Техника окраски по Здродовскому.

На фиксированный мазок наносят карболовый раствор Циля предварительно растворенный в бидистиллированной водой или фосфатным буфером при рН 7,4 в соотношении 10 - 15 капель краски на 10 мл воды или буфера на 5 минут. Затем быстро (1 - 3 секунды) дифференцируют в 0,5%-ной лимонной или 0,15%-ной уксусной кислоте путем погружения мазка в ванночку с кислотой. Промывают водой (обильно) и докрашивают 0,5%-ным раствором метиленовой сини 10 секунд. Промывают, высушивают на воздухе и микроскопируют.

Эперитрозооны окрашиваются в рубиново-красный цвет, клеточные элемнты в голубой (протоплазма) или синий (ядра) цвет.

При остром течении риккетсии в виде зерен поражают 80 - 100% эритроцитов; при хронической и субклинической - 10 - 30% эритроцитов с единичными зернами; в латентной форме не обнаруживаются.

Обнаружение микроорганизмов с характерной морфологией и тинкториальными свойствами является основанием для постановки диагноза на эперитрозооноз.

Серологический метод

Включает исследование сыворотки крови в РСК и ИФА с целью выявления антител. ИФА может быть использована для идентификации возбудителя. Постановка серологических реакций проводится согласно наставлению по применению тест-систем.

Молекулярно-генетический метод.

Предусматривает постановку ПЦР. Данный метод является наиболее чувствительным и специфичным в идентификации Eperythrozoon suis.

Биологический метод.

Проводится на поросятах 2 - 4 месячного возраста. Поросят инфицируют кровью или переливанием крови от больного животного здоровому. Клинические признаки заболевания проявляются через 3 максимум 4 недели. Биопробу считают положительной при характерной клинической картине и обнаружении возбудителя микроскопическим методом.

Гематологические исследования.

Кровь, взятая непосредственно в течении лихорадки, имеет блестящую поверхность и не осаждается на стенках пробирки, а агглютинируется при комнатной температуре. Микроагглютинация характерный признак для Eperythro-zoon suis. Кровь исследуется сразу же после взятия. Температура крови и материалов должна быть 37 ?С.suis вызавает гемолитическую анемию с характерными нормахромной и хромоцитной анемиями. Показатели болезни и ее тяжести - количество эритроцитов в крови животных, содержание гемоглобина и гематокрит. У больных животных наблюдается снижение количества эритроцитов до 2,6 млн/мл и 80% эритроцитов пораженены. Также прогрессирует нейтрофильный лейкоцитоз, снижается количество тромбоцитов и плазма крови приобретает желтушное окрашивание.

В крови снижение количества эритроцитов, и снижение значений гемотокрита и гемоглобина.

В сыворотке исследуется содержание билирубина и способность связывания железа.

На результат исследования указывают: количество эритроцитов от 1 до 2 * 1012/л, гемоглобин 20-40 г/л, часто 70-90 г/л., лейкоцитов 20-50 * 109 /л.

На лейкограмме увеличение количества лимфоцитов и моноцитов.

При субклинической форме количество эритроцитов уменьшается до 2,4-5 млн, лейкоцитов возрастает до 8,5 тыс., СОЭ ускорена, возможны нейтрофилия и эозинофилия. Пораженность эритроцитов достигает 90%.

Гистологический метод.

Проводят гистологическое исследование печени, почек и селезенки с целью установления скоплений гемосидерина. Решающего значения не имеет.

Диагноз на эперитрозооноз считают установленным в одном из следующих случаев:

При обнаружении микроскопическим методом в мазках крови клинически больных животных эперитрозоонов с характерной морфологией и тинкториальными свойствами;

При обнаружении специфических антител в РСК, ИФА;

При идентификации возбудителя в ИФА или ПЦР.

Иммунитет, средства специфической профилактики и терапия.

Иммунитет окончательно не изучен. Установлено, что в результате переболевания иммунный ответ неполный и кратковременный. В процессе болезни вырабатываются антитела класса Ig M.

Средств спецефической профилактики и терапии не разработано.

Больных изолируют и лечат, а подозрительных в заболевании и паразитоносителей обрабатывают одно- или двукратно лекарственными препаратами.

Больным животным создают покой и улучшают кормление. Свиньям на откорме с признаками острого течения заболевания для лечения применяется парэнтеральное введение окситетрациклина в дозе 20 - 30мг/кг живой массы. Парэнтерально окситетрациклин можно также давать свиньям в инфицированных стадах (неблагополучных) время от времени при стрессах: перегрупировках и после ветеринарных и зоотехнических процедур. Тем не менее наряду с парэнтеральным введением можно проводить и оральные обработки, а также сочетанные обработки. Это может уменьшить возникновение анемий.

Здоровым поросятам и отстающим в росте дополнительно нужно давать препараты железа.

Свиньям также назначают неоарсфенамин (новарсенол) - 15 - 45 мг на 1 кг живой массы. Хорошие результаты дают препараты азидина и мышьяковистой кислоты. Симтоматические средства в зависимости от показаний.

Курс лечения составляет 3 - 4 недели.

С целью профилактики в хозяйстве должна иметься программа обработак против экто- и эндопаразитов. Должны быть приняты меры предосторожности перезаражения животных при любых процедурах с кровью: передача при хирургических операциях, ветеринарных обработках - эти операции должны быть ограничены при работе с инфицированными животными. Должны иметься отдельные стерильные инструменты и материалы для каждой зоотехнической процедуры: перегруппировках, кастрациях, обрезании хвостов и других операциях не менее двух наборов инструментов в достаточном количестве. Проводить тщательные дезинфекции после каждой зоотехнической процедуры.

Список использованной литературы

1.Авроров В.Н., Черванев В.А. Электронно-микроскопические исследования при риккетсиозе крупного рогатого скота // Ветеринария. - 1991. - № 10. - С. 29-31.

2.Андриасян В.Б., Урбан В.П. Инфекционный кератоконъюнктивит у крупного рогатого скота в Северо-Западной зоне РСФСР // Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных и птиц: Сб.науч.тр./Л., 1987. - С. 14-20.

.Ветеринарная микробиология / Под ред. Профессора Е.В. Козловского и П.А. Емельяненко. - М.: Колос, 1987. - С. 226-272.

.Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.А. Радчук, Г.В. Дунаев, Н.М. Колычев и др.; Под ред. Н.А. Радчука. - М.: Агропромиздат, 1991. - С. 312-322.

.Гусев М.В., Михеева Л.А. Микробиология. - М.: Изд. Московского университета, 1987. - С. 171-172.

.Даниэл М. Тайные тропы смерти: Пер с чеш./ Под ред. Б.А. Черкасского. - М.: Прогресс, 1990. - 186 с.

.Инфекционные болезни животных: Справочник / Сост. Ю.Ф. Борисович, Л.В. Кириллов; Под ред. Д.Ф. Осидзе. - М.: Агропромиздат, 1987. - С. 151-157.

.Карантинные и малоизвестные болезни животных / Под ред. И.А. Бакулова. - М.: Колос, 1983. - С. 260-264.

.Колешко О.И. Микробиология. - Мн.: Вышэйшая школа, 1977. - С. 73.

.Коляков Я.Е. Ветеринарная микробиология. - 2-е изд., доп. и перераб. - М.: Сельхозгиз, 1960. - С. 322-328.

.Лабораторные исследования в ветеринарии: вирусные, риккетсиозные и паразитарные болезни: Справочник / Под ред. Б.А. Антонова. - М.: Агропромиздат, 1987. - С. 191-198.

.Лочкарев В.А., Дмитриев В.А. Лечение при риккетсиозе глаз у крупного рогатого скота // Ветеринария. - 1990. - № 6. - С. 47.

.Малоизвестные заразные болезни животных / Сост. Ф.М. Орлов. - 2-е изд., доп. и перераб. - М.: Колос, 1973. - С. 186-206, 289-295.

.Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник / Л.Б. Борисов, А.М. Смирнова, И.С. Фрейдлих и др.; под ред Л.Б. Борисова, А.М. Смирновой. - М.: Медицина, 1994. - 528 с.

.Молекулярная микробиология: Пер. с англ. / Под. ред. Б.Н. Ильяненко. - М.: Мир, 1977. - С. 379-419.

.Моноцитарный эрлихиоз лошадей/ обзор иностранной литературы // Ветеринария. - 1988. - № 2. - С. 69-71.

.Никитин В.Л., Тимченко Л.Д. Роль риккетсий в заболеваемости коров послеродовым метритом // Ветеринария. - 1994. - № 10. - С. 44-45.

.Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т.1: Пер. с англ./Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита и соавт. - М:., Мир, 1997. - 432 с.

.Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных / К.И. Абуладзе, Н.В. Демидов, А.А. Непоклонов и др.; Под ред.: К.И. Абуладзе. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Агропромиздат, 1990. - С. 358-362.

.Практикум по частной микробиологии / Под ред. А.А. Гласкович. - Мн.: Ураджай, 2000. - 250 с.

.Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, Е.И. Скаршевская, С.С. Гительсон. - М.: Агропромиздат, 1989. - С. 245-248.

.Руководство по лабораторной диагностике вирусных и риккетсиозных болезней / Под ред. Действительного члена АМН СССР, профессора П.Ф. Здродовского, профессора М.И. Соколова. - М.: Медицина, 1968. - С. 468-591.

.Смирнова Н.И. Ветеринарная микробиология: Уч. пособие для ветеринарных ВУЗов. - Мн.: Вышэйшая школа, 1979. - С. 198-200.

.Справочник по болезням сельскохозяйственных животных / Д.Д. Бутьянов, И.М. Карпуть, М.В. Якубовский и др.; 2-е изд., перераб. и доп. - Мн.: Ураджай, 1990. - С. 257.

.Справочник специалиста ветеринарной лаборатории / Н.В. Коротченко, Ю.П. Смиян, А.П. Адаменко и др.; Под ред. Ю.П. Смияна. - К.: Урожай, 1987. - С.200.

.Тропические болезни животных / А.А. Конопаткин, А.В. Степанов, Г.И. Забалуев и др.; Под ред. А.А. Конопаткина. - М.: Агропромиздат, 1990. - С. 99-104, 160-165.

.Тузова Р.В. Микробные и вирусные заболевания животных, опасные для человека (зоонозы). - Мн.: Ураджай, 1969. - С. 247-251.

.Юров Н.П. Инфекционные болезни лошадей. М.: Росагропромиздат, 1991. - С. 153-157.

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь Витебская государственная академия ветеринарной медицины Кафедра микробиологии и вир

Больше работ по теме: